Биологическая роль, структура и выделение митохондрий из печени крыс.
гомогенизируют 20 секунд в 20 мл среды выделения. Гомогенат
центрифугируют при 600 д 10 минут, супернатант объединяют с полученным
ранее.
Для осаждения митохондрии, объединенный супернатант центрифугируют в
двух стаканах при 14000 g в течение 10 минут. Остатки объединяют в одном
стакане и тщательно суспендируют с помощью пипетки на 1 мл в небольшом
объеме среды выделения (около 0,5 мл). .Маленькими порциями, при осторожном
встряхивании добавляют 10 мл среды выделения и осаждают митохондрии (14000
g, 10 минут). Осадок суспендируют в 0,25 М сахарозе, не содержащей ЭДТА, и
вновь центрифугируют (14000 g, 10 минут). Супернатант сливают, на
полученный осадок митохондрии осторожно наслаивают 0,2 - 0,3 мл 0,25 М
сахарозы. Легким встряхиванием смывают верхний рыхлый слой осадка.
Процедуру повторяют еще дважды и полученный плотный осадок митохондрии
тщательно суспендируют с помощью пипетки в 0,4 - 0,5 мл 0,25 М сахарозы.
Густую суспензию митохондрии переносят в пробирку и хранят на льду.
Заключение
В данной работе предложены различные методики выделения митохондрии из
печени крыс, но использоваться будет метод с применением
ультрацентрифугирования, как наиболее приемлемый и удовлетворяющий
критериям простоты работы и необходимой степени чистоты продукта.
В дальнейшем планируется фотометрическое изучение влияния этидиум
бромида на активность цитохрома с из митохондрии печени крыс. Данная работа
представляет практический интерес, так как цитохром с является индуктором
апоптоза - программированной гибели клеток. Механизмы этого процесса в
настоящее время представляют большой интерес (для лечения онкологических
заболеваний).
Список литературы
1. Альбертсон Пер-Оке "Разделение клеточных частиц и макромолекул", Москва,
1974
2. Боуэн Т. "Введение в ультрацентрифугирование", Москва, 1973
3. Под ред. Гилярова М.С. "Биология. Большой энциклопедический словарь",
Москва, 1998
4. Ленинджер А. "Митохонрия" Москва "Мир", 1966
5. Решетников В.Н. и др. "Техника биохимического исследования субклеточных
структур и биополимеров" т.2, Минск, 1977
6. Эванз У. Г. "Биологические мембраны. Методы", Москва, 1990
| |  скачать работу |
Биологическая роль, структура и выделение митохондрий из печени крыс. |
