Химия наследственности. Нуклеиновые кислоты. ДНК. РНК. Репликация ДНК и передача наследственной информации
и
поликислотными электролитами, легко достигается растворением в крепком
солевом растворе или обработкой тиоцианатом калия. Большую часть белка
можно удалить либо добавлением этанола, либо эмульгированием с помощью
хлороформа и амилового спирта (белок образует с хлороформом гель). Широко
применялась также обработка детергентами. Позднее дезоксирибонуклеиновые
кислоты выделяли с помощью экстракции водными n-аминосалицилат — фенольными
растворами. При использовании этого метода были получены препараты
дезоксирибонуклеиновой кислоты, из которых одни содержали остаточный белок,
тогда как другие были фактически свободны от белка, что указывает на то,
что характер связи белок — нуклеиновая кислота различен в различных тканях.
Удобная модификация состоит в гомогенизировании животной ткани в 0,15 М
растворе фенолфталеиндифосфата с последующим добавлением фенола для
осаждения ДНК (свободной от РНК) с хорошим выходом.
Дезоксирибонуклеиновые кислоты, каким бы способом они не выделялись,
представляют собой смеси полимеров различного молекулярного веса, за
исключением образцов, полученных из некоторых видов бактериофагов.
4.4. Фракционирование
Ранний метод разделения заключался в фракционной диссоциации гелей
дезоксирибонуклеопротеида (например, нуклеогистона) посредством экстракции
водными растворами хлористого натрия увеличивающейся молярности. Таким
путем препараты дезоксирибонуклеиновой кислоты были разделены на ряд
фракций, характеризующихся различным отношением содержания аденина с
тимином к сумме гуанина с цитозином, причем более легко выделялись фракции,
обогащенные гуанином и цитозином. Сходные результаты были получены при
хроматографическом отделении дезоксирибонуклеиновой кислоты от гистона,
адсорбированного на кизельгуре, с применением градиентного элюирования
растворами хлористого натрия. В улучшенном варианте этого метода очищенные
фракции гистона сочетались с n-аминобензилцеллюлозой с образованием
диазомостиков от тирозиновых и гистидиновых групп белка. Описано также
фракционирование нуклеиновых кислот на метилированном сывороточном
альбумине (с кизельгуром в качестве носителя). Скорость элюирования с
колонки солевыми растворами увеличивающейся концентрации зависит от
молекулярного веса, состава (нуклеиновые кислоты с высоким содержанием
гуанина с цитозином элюируются легче) и вторичной структуры
(денатурированная ДНК прочнее удерживается колонкой, чем нативная). Таким
способом из ДНК морского краба Cancer borealis выделен природный компонент
— полидезоксиадениловая-тимидиловая кислота. Фракционирование
дезоксирибонуклеиновых кислот проводилось также посредством градиентного
элюирования с колонки, наполненной фосфатом кальция.
4.5. Функции ДНК
В молекуле ДНК с помощью биологического кода зашифрована
последовательность аминокислот в пептидах. Каждая аминокислота кодируется
сочетанием трех нуклеотидов, в этом случае образуется 64 триплета, из
которых 61 кодируют аминокислоты, а 3 являются бессмысленными и выполняют
функцию знаков препинания (АТТ, АЦТ, АТЦ). Шифрование одной аминокислоты
несколькими триплетами получило название как вырожденность триплетного
кода. Важными свойствами генетического кода является его специфичность
(каждый триплет способен кодировать только одну аминокислоту),
универсальность (свидетельствует о единстве происхождения всего живого на
Земле) и неперекрываемость кодонов при считывании.
ДНК выполняет следующие функции:
V хранение наследственной информации происходит с помощью гистонов.
Молекула ДНК сворачивается, образуя вначале нуклеосому, а после
гетерохроматин, из которого состоят хромосомы;
V передача наследственного материала происходит путем репликации ДНК;
V реализация наследственной информации в процессе синтеза белка.
5. РНК
5.1. Состав РНК
Первые сведения о нуклеотидном составе РНК относились к препаратам,
представляющим собой смеси клеточных РНК (рибосомных, информационных и
транспортных) и называемым обычно суммарной фракцией РНК. Правила Чаргаффа
в этом случае не соблюдаются, хотя определенное соответствие между
содержанием гуанина и цитозина, а также аденина и урацила все же имеет
место.
Данные, полученные в последние годы при анализе индивидуальных РНК,
показывают, что и на них правила Чаргаффа не распространяются. Однако
различия в содержании аденина и урацила, а также гуанина и цитозина для
большинства РНК невелики и что, следовательно, тенденция к выполнению
указанных правил все же наблюдается. Этот факт объясняется особенностями
макроструктуры РНК.
Характерными структурными элементами некоторых РНК являются минорные
основания. Соответствующие им нуклеотидные остатки обычно входят в состав
транспортных и некоторых других РНК в очень небольших количествах, поэтому
определение полного нуклеотидного состава таких РНК представляет собой
иногда весьма сложную задачу.
5.2. Макромолекулярная структура РНК
Химически РНК очень похожа на ДНК. Оба вещества - это линейные
полимеры нуклеотидов. Каждый мономер - нуклеотид - представляет собой
фосфорилированный N-гликозид, построенный из остатка пятиуглеродного сахара
- пентозы, несущего фосфатную группу на гидроксильной группе пятого
углеродного атома (сложноэфирная связь) и азотистое основание при первом
углеродном атоме (N-гликозидная связь). Главное химическое различие между
ДНК и РНК состоит в том, что сахарный остаток мономера РНК - это рибоза, а
мономера ДНК - дезоксирибоза, являющаяся производным рибозы, в котором
отсутствует гидроксильная группа при втором углеродном атоме (рис. 4).
[pic]
Рис.4. Химические формулы остатков одного из рибонуклеотидов – уридиловой
кислоты (U) и гомологичного ему
дезоксирибонуклеотида тимидиловой кислоты (dT)
Азотистых оснований в РНК четыре вида: два пуриновых - аденин (А) и
гуанин (G) -и два пиримидиновых - цитозин (С) и урацил (U)
Мономеры - рибонуклеотиды РНК - образуют полимерную цепь посредством
формирования фосфодиэфирных мостиков между сахарными остатками (между пятым
и третьим атомами углерода пентозы). Таким образом, полимерная цепь РНК
может быть представлена как линейный сахаро-фосфатный остов с азотистыми
основаниями в качестве боковых групп.
Впервые специфическая пространственная структура РНК была
продемонстрирована при расшифровке атомной структуры одной из т-РНК в 1974
г. (рис. 5). Сворачивание полимерной цепи тРНК, состоящей из 76
нуклеотидных мономеров, приводит к формированию очень компактного
глобулярного ядра, из которого под прямым углом торчат два выступа. Они
представляют собой короткие двойные спирали по типу ДНК, но организованные
за счет взаимодействия участков одной и той же цепи РНК. Один из выступов
является акцептором аминокислоты и участвует в синтезе полипептидной цепи
белка на рибосоме, а другой предназначен для комплементарного
взаимодействия с кодирующим триплетом (кодоном) м-РНК в той же
рибосоме. Только такая структура способна специфически взаимодействовать с
белком-ферментом, навешивающим аминокислоту на т-РНК, и с рибосомой в
процессе трансляции, то есть специфически "узнаваться" ими.
[pic]
Рис. 5. Атомная (слева) и скелетная (справа) модели фенилаланиновой т-
РНК дрожжей
Изучение изолированных рибосомных РНК дало следующий разительный
пример формирования компактных специфических структур из еще более длинных
линейных полимеров этого типа. Рибосома состоит из двух неравных частей -
большой и малой рибосомных субчастиц (субъединиц). Каждая субчастица
построена из одной высокополимерной РНК и целого ряда разнообразных
рибосомных белков. Длина цепей рибосомных РНК весьма значительна: так, РНК
малой субчастицы бактериальной рибосомы содержит более 1500 нуклеотидов, а
РНК большой субчастицы - около 3000 нуклеотидов. У млекопитающих, включая
человека, эти РНК еще больше - около 1900 нуклеотидов и более 5000
нуклеотидов в малой и большой субчастицах соответственно.
5.3. Мультифункциональность РНК
Суммирование и обзор знаний о функциях РНК позволяют говорить о
необыкновенной многофункциональности этого полимера в живой природе. Можно
дать следующий список основных известных функций РНК.
• Генетическая репликативная функция: структурная возможность
копирования (репликации) линейных последовательностей нуклеотидов через
комплементарные последовательности. Функция реализуется при вирусных
инфекциях и аналогична главной функции ДНК в жизнедеятельности клеточных
организмов - редупликации генетического материала.
• Кодирующая функция: программирование белкового синтеза линейными
последовательностями нуклеотидов. Это та же функция, что и у ДНК. И в ДНК,
и в РНК одни и те же триплеты нуклеотидов кодируют 20 аминокислот белков, и
последовательность триплетов в цепи нуклеиновой кислоты есть программа для
последовательной расстановки 20 видов аминокислот в полипептидной цепи
белка.
• Структурообразующая функция: формирование уникальных трехмерных
структур. Компактно свернутые молекулы малых РНК принципиально подобны
трехмерным ст
| |  скачать работу |
Химия наследственности. Нуклеиновые кислоты. ДНК. РНК. Репликация ДНК и передача наследственной информации |
