Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных гепатитов
G
HGV был выделен из крови больных гепатитами ни А ни В группой ученых
Abbot Laboratories в 1995 году. HGV относится к инфекциям с парентеральным
механизмом передачи. Возможен также половой и вертикальный путь к
инфицированию. В пользу гепатотропности HGV свидетельствует обнаружение
РНК HGV в клетках печени, а также развитие острого и фульминантного
гепатита вслед за трансфузиями крови или ее продуктов [10], [7].
Таксономическое положение HGV остается невыясненным. Его условно относят к
семейству Flаviviridae. Геном образован несегментированной молекулой +РНК,
и имеет протяженность 9103 до 9392 (в различных изолятах вируса)
нуклеотидов. Состоит из двух структурных HGV свидетельствует роррррр и
четырех неструктурных участков, кодирующих белки с функциями, аналогичными
функциями соответствующих белков HCV. Особенностью HGV является присутствие
дефектного сердцевинного (core) Белка или полное его отсутствие. На 5’ и 3’
нетранслируемых участков имеются элементы, необходимые для регуляции
жизнедеятельности вируса. Установлено, что происходящие вблизи 5' участка
вставки и выпадения нуклеотидов сдвигают открытую рамку считывания РНК –
вируса, приводя к появлению дефектного (core) белка или же полного его
отсутствия. Высказываются предположения об использовании HGV – капсидных
белков других, возможно еще не открытых вирусов, выполняющих в данном
случае роль структурных полипротеинов [12].
Еще одна особенность HGV заключается в отсутствии в генах, кодирующих
наружные гликопротеины, гипервариабельной области. Также, как HCV, ВИЧ и
другие РНК – содержащие вирусы. Вирусы HGV обладают двумя уровнями
вариабельности геномной РНК. Первый заключается в различиях между вирусными
геномами, циркулирующими в одном организме квазиды. Второй основан на
различиях между вариантами вирусов, обнаруженными в различных организмах, -
генотипы. Различные квазиды HGV обладают различной тканевой специфичностью
[11].
При классификации вирионов HGV за расхождения типов применяется уровень
расхождения нуклеотидной последовательности. ? 30%, а субтипы разделяют при
наличии 15% расхождений. Различия между вариантами HGV полной нуклеотидной
последовательности генома составляет 10 – 15% и варьирует в зависимости от
участка генома от 5 до 30%. В связи с этим принято разделять только
генотипы HGV и обозначать их цифрой. К настоящему времени принято выделять
5 генотипов HGV. Исследования участка РНК HGV ІІ и экспериментальное
экспрессирование кодированных им белков определено наличие пяти белков с
массой, в пределах 20 70 кD. Эти белки выполняют функции протеазы, хеликазы
и РНК - зависимой РНК – полимеразы [10,12,16].
1. Эпидемиология HGV.
Установлена закономерность встречаемости генотипа вируса от территории
обнаружения.
HGV1 – Западная Африка
HGV2 – Северная Америка, Европа, Азия, Северная Африка
HGV3 – Юго-Восточная Азия
HGV4 – Южная Африка.
Источниками распространения HGV являются больные острым, хроническим
HGV и носители. Среди лиц, вводящих себе внутривенно наркотики, HGV
выявляется в три раза чаще, чем у других наркоманов.
При HGV возможен и половой путь заражения. Отмечено увеличение процента
выявления HGV в зависимости от количества половых партнеров, от 8 до 21% (у
лиц с наличием более 100 партнеров). Гомосексуалисты – мужчины подвержены
риску на 95% [19].
Можно считать доказанным существование «вертикального пути передачи»
HGV от матери к ребенку. HGV заражено, примерно 1% населения. Инфекция
характеризуется длительной персистенцией до 8 лет с переходом 36% в
хроническую форму [16,21].
6. Вирус гепатита ТТV
В 1997 году японские ученые во главе с T. Neshirawa с помощью варианта
реакции амплификации генов (репрезентативного дифференциального анализа),
предназначенная для поиска еще неизвестных вирусов, исследовали сыворотки
крови, собранные от пяти пациентов. Был выделен клон размером в 500
оснований ранее неизвестного вируса. Учитывая что он выделен от людей с
посттрансфузионным гепатитом его обозначили как TTV (transfusion –
transmited virus), то есть, вирус, передаваемый при переливании [9,10]. При
дальнейшем исследовании TTV по молекулярному клонированию и характеристике
установлено, что он (изолят ТА278) содержит линейную одноцепочечную ДНК,
протяженностью 37 - 39 оснований [16]. При поиске гомологий
последовательностей ДНК TTV с ДНК других вирусов не обнаружено тех
последовательностей, которые были достоверны гомологичны. При анализе
выявлены две открытые рамки считывания (ORF), обозначенные как ORF1 и ORF2,
которые соответственно кодируют 770 а. к. и 202 а. к.
Фракционирование вируса в градиенте плотности сахарозы с
продолжительной обработкой, содержащего вирус – материала твином – 80 и без
нее выявлено, что в обоих случаях пик плотности TTV соответствовал 1,26
г/см3. Эти данные указывают на отсутствие у вируса липидной оболочки.
Важные результаты получены при выявлении ДНК TTV из ткани печени. Вирус
обнаружен в биопсийном материале пяти пациентов. ДНК TTV у них выявлено в
сыворотке крови. При чем, в печеночной ткани концентрация ДНК TTV оказалась
выше. Это говорит о гепатропности TTV. Кроме гепатоцита TTV удалось
идентифицировать в мононуклеарах периферической крови у четырех человек из
восьми, в сыворотке крови которых имелось ДНК TTV [18].
1. Систематизация гепатита TTV.
Сравнение свойств TTV с известными ДНК – содержащими вирусами дало
основание предположить, что он наиболее близок к вирусам, входящим в
семейство Circoviridae и в семейство Parvoviridae. Полученные данные не
позволили установить к какому из этих семейств относится TTV. Однако, в
пользу парвовирусов могут служить следующие установленные факты: парвовирус
гусей (GPV) может быть этиологическим агентом смертельного гепатита гусей,
а парвовирус человека B19 ранее рассматривался как причина нескольких
случаев гепатита [19,20].
2. Алиментарное заражение TTV
Известно, что некоторые парвовирусы млекопитающих, такие, как
парвовирус кошек и вирус энтерита норок, имеют фекально – оральный механизм
передачи. Эта информация и высокая вероятность того, что TTV – парвовирус,
позволила Окамото предположить и экспериментально доказать наличие этого
вируса в фекалиях больных гепатитом, ассоциированным с TTV. Он был
определен у трех из пяти пациентов, в крови которых была позитивная ПЦР,
свидетельствующие о TTV. Причем, в одном случае титр TTV в фекалиях был
выше, чем в сыворотке крови: 105 и 104. плавучая плотность в градиенте CsCl
вирусов, выделенных из фекалий и сыворотки крови, оказалась близка (1,35 и
1,32 г/см3) [10,16].
3. Взаимосвязь гепатита TTV с географическим регионом.
Полученные результаты позволили обосновать гипотезу о том, что TTV
может передаваться как парентерально, та и фекально – орально. Анализируя
нуклеотидные последовательности различных изолятов вируса выделили две
группы вирусов (генотипы), ДНК которых отличается друг от друга
последовательностями более чем на 30%. Они получили обозначение G1, G2.
Внутри каждого генотипа (при отличиях 11 – 15%) выделили субтипы G1a, G1b и
G2a, G2b. При дальнейшем анализе новых изолятов вируса выявлен третий
генотип вируса G3, а также ранее неизвестный субтип 1С. При
филогенетическом анализе ДНК TTV 190 изолятов вируса, обнаруженных в Азии,
Африке и Южной Америке, установлено наличие дополнительных субтипов – 2с,
2d, 2e, 2f. В сыворотке крови больных гепатитом неизвестной этиологии
зарегистрирован четвертый генотип TTV. Обобщая исследования по
генотипированию можно сделать следующие выводы: наиболее широко
представлены субтипы 1а и 1в; отсутствует взаимосвязь того или иного
генотипа с географическим регионом, не удается провести параллели с
источником TTV (донор крови, больной острым или хроническим гепатитом)
[18].
С. Вязов при сравнительном изучении 73 изолятов из 16 стан, в том числе
из России установили резкое отличие нуклеотидной последовательности одного
из изолятов Gав473, выявленного в республике Габон от других. Его сходство
с другими составило 45 – 53% по нуклеотидным последовательностям и 36 – 42%
по аминокислотам. На основании этих данных предложено объединить генотипы
G1 и G2 в Олин генотип, обозначив его как G1 с выделением субтипов 1а и 1в,
а изученный изолят Gab473 отнести к генотипу G2. исходя из этой
классификации ученые при типировании 10 «российских» и трех «казахстанских»
изолятов установили, что TTV, циркулирующие в этих регионах, формируют
единую филогенетическую группу и относятся к генотипу 1в [19,22].
4. Эпидемиология TTV
Частота выявления ДНК TTV у доноров крови в США составляют 1 %, в
Великобритании – 1,9%, в Японии – 41%. Причем, как нередко бывает в начале
исследования, результаты, полученные различными авторами на одной
территории значительно варьирует. Так, при исследовании в Японии доноров
крови частота выявления ДНК TTV составила диапазон от 13 до 42%. ДНК TTV
обнаружено в препаратах, изготовленных из плазмы крови, в факторах восемь и
девять, независимо от того, инактивировали их или нет. В
| |  скачать работу |
Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных гепатитов |
