Гепарин
и ряда ферментативных систем и т.д.
Однако наиболее изученным и имеющим большое практическое применение
является антикоагулянтный эффект гепарина . Поэтому говоря о биологическом
действии гепарина, в основном говорят о его антикоагулянт-
ных свойствах .
Обнаружено , что антикоагулянтная активность гепарина связана с
особенностями строения его молекулы . Так ( антикоагулянтная активность
зависит от содержания серы ( степени сульфатированния ( количества
и расположения О - сульфатных групп ( а также от размера скелета молекулы
этого полисахарида . Активность выше в препаратах с большим содержанием
эфиросвязанной серы . С.В. Бычков и В.Н. Харламова (1975) показали ( что
активность фракции ( в которой на дисахаридную структурную единицу прихо-
дится четыре остатка серной кислоты ( в 1,4 раза превышает активность фра-
кции гепарина с тремя остатками . Таким образом ( антикоагулянтные актив
-ность гепарина растет по мере увеличения содержания в молекуле остат-
ков серной кислоты. Видимо( данная активность зависит от положения остатков
серной кислоты в молекуле гепарина ( а также от длины цепи моле кулы . В
экспериментах с плазмой крови кроликов получено ( что максималь-
ная антикоагулянтная активность гепарина проявляется при рН плазмы
7,3—7,5 ( а минимальная при рН 6,1—6,5.
Высказано утверждение ( что биологическая активность гепарина опреде-
ляется степенью сульфатации ( карбоксилации ( а также размером ( формой
молекулы и молекулярным весом . В частности ( показано ( что
десульфирование ( происходящее в результате мягкого гидролиза ( сопро-
вождается уменьшением биологической активности . При сильной щелочной
реакции среды гепарин разрушается ( что выражается в быстрой потере им
в первую очередь антилипемической активности . С другой стороны ( даже
низкая кислотность вызывает потерю гепарином антикоагулянтной активности.
Причем степень этой потери прямо пропорциональна степени появления в
молекуле гепарина свободных аминогрупп . Полная инактивация происходит
когда более половины азота присутствуют в форме свободных NH2 - групп .
Под действием горячей уксусной кислоты гепарин теряет значительную часть
антикоагулянтной активности при одновременном сохранении молекулярного
веса и содержания глюкозамина . При этом наблюдается увеличение кон-
станты седиментации и степени полидисперсности параллельно с умень-
шением фрикционного соотношения . Предполагается ( что аминный азот (
который первым отщепляется в процессе рекристаллизации гепарина после
его обработки кислотой ( играет важную роль в проявлении
антикоагулянтной
активности . При рН среды 1—2 и 25( в течение 25 часов изменения биоло-
гической активности гепарина не происходит . Изменение активности наб-
людается после воздействия в течение 60 часов рН 4,4 и 23( . Видимо
под влиянием кислоты в молекуле гепарина образуются внутренние эфиры
( что объясняет наблюдаемые изменения молекулярного веса ( внутренней
вязкости и состава молекулы .
Многочасовое воздействие на бычий (- и (- гепарин 40%-ной
уксусной
кислотой при 37( сопровождалось потерей этими веществами 7—8% суль-
фатных групп и почти 100% антикоагулянтных свойств .
Гепарин не изменяет своих нативных свойств ( в частности
антикоагу-
лянтной активности ( в процессе обработки его паром при 100( в
течение
часа при рН 7 . Следовательно ( гепарин можно стерилизовать .
Отмечена корреляция между антикоагулянтной активностью фракций
гепарина и его молекулярным весом . Так даже при незначительном
уров- не сульфата (2,0 — 2,8 сульфатных групп на остаток глюкозы) у
препара-
тов гепарина с низким молекулярным весом (степень полимеризации равна
9) отмечалась слабая активность . Интересно ( что сульфатированные дек-
страны с высоким молекулярным весом также проявляют весьма высокую
антикоагулянтную активность . Активность низкомолекулярных фракций гепа-
рина мала . Антикоагулянтная активность гепарина с молекулярным весом
от 2500 до 15500 увеличивается по мере возрастания молекулярного
веса
до 10000 ( но дальнейшее возрастание не вызывает заметных сдвигов .
Уменьшение молекулярного веса гепарина при гидролизе в большей мере
обусловлено степенью десульфатации молекулы ( чем ее деполимеризации.
При частичном гидролизе отмечено также падение молекулярного
веса
и соотношения осей молекулы гепарина ( а также снижение вязкости в
воде . С помощью дисперсии оптического вращения показано ( что N -
- десульфатация гепарина не изменяет его естественной структуры ( но
полная десульфатация вызывает исчезновение нативной конформации .
(-облучение вызывало деполимеризацию гепарина ( но десульфатация при
этом не наблюдалась . Воздействие УФ - излучения снижало антикоагулян-
тную активность и уменьшало потенциальную возможность связывания их
катионных красителей . Поток же электронов обусловливал деполиремиза-
цию гепарина .
Действие гепарина ( ингибитора практически всех фаз процесса
сверты-
вания крови ( проявляется при наличии и участии кофактора гепарина (
присутствующего в плазме крови . Кофактор гепарина ( возможно (
предста- вляет собой одну из фракций сывороточного альбумина .
Прежде всего необходимо подчеркнуть ( что в настоящий момент нет
пол-
ной ясности относительно механизмов биосинтеза гепарина . Исходные
вещества необходимые организму для образования гепарина ( - глюкоза и
неорганический фосфат . Сульфатация происходит в тучных клетках
сразуже вслед за полимеризацией . Напротив ( Райс и соавторы (Rice et
al.(1967)
считают ( что перенос сульфата происходит на низкомолекулярные пред-
шественники . Предполагают также ( что способность управлять переходом
сульфата в N - десульфированный гепарин проявляет микросомальная
фракция из гомогената мастоцитов опухоли и что свободные
аминогруппы
необходимы для энзиматической N - сульфатации гликозаминогликанов
На основании экспериментов ( проводимых на ткани мастоцитомы
мы - ши ( по изучению биосинтеза специфического остатка глюкуроновой
кис- лоты была предложена схема реакций биосинтеза в области связи
ге-
парин - полипептид . Высказано предположение ( что в процессе синтеза
происходит ряд специфических гликозилтрансферазных реакций . При этом
продукт каждого предыдущего этапа служит субстратом для следующей
реакции . Для каждой реакции переноса необходим отдельный фермент .
наличие одного из таких ферментов - глюкуронозилтрансферазы обнаруже-
но в мембране тучных клеток .
Вопрос о точной локализации структур ( связанных с биосинтезом
гепарина ( до сих пор не решен . Однако есть многочисленные указания
на то ( что непосредственное отношение к синтезу имеют тучные
клетки
соединительной ткани ( а также генетически родственные и функциональ-
но близкие им базофильные клетки крови ( в связи с чем и те и
другие
получили название “гепариноциты”. Доказано ( что содержащие гепарин
гранулы тучных клеток выделяют это вещество в межклетники и кровь
.
Также базофилы служат источником гепарина ( выделяя в плазму крови
небольшие порции этого антикоагулянта . Но отмечая несоответствие
между общим количеством гепарина в организме и его содержанием в
тучных клетках ( предполагает возможность существования и других
источ-
ников гепарина .
Известно ( что тучные клетки ( имеющиеся в организме не только
выс-
ших животных ( но и морских звезд ( моллюсков ( ракообразных и
представляющие собой обязательную часть соединительной ткани ( разви-
ваются из тканей мезенхимы . Предшественниками тучных клеток являют-
ся ( очевидно ( промакрофоги моноцитарного происхождения . Вероятно ( кле-
точные элементы крови моноцитарного ряда ( проникая в межклетники сое-
динительной ткани ( дают начало тучным клеткам . Как считается (
молодые
тучные клетки берут свое происхождение от клеток ( подобных средним
лимфоцитам . последние также активно синтезируют гепарин и другие
су-
льфатированные мукополисахариды .
Основанием для утверждения о непосредственном отношении тучных клеток
к процессу свертывания крови послужило их расположение вблизи
кровеносных сосудов ( а также то ( что они являются носителями
гепарина.
До 90% всей массы тучных клеток приходится на заполняющие цитоплаз-
му базофильные метахроматические гранулы диаметром 0(3 - 1(0 мк . На
1 мг тучных клеток крысы приходится 316 международных единиц гепарина(
который весьма прочно связан с гранулами ( так что его можно
выделить
лишь после их разрушения . Наряду с этим имеются указания на то (
что
гепарин находится в цитоплазме в свободном состоянии .
В пользу того ( что гепарин синтезируется в тучных клетках (
говорит факт обнаружения в них ряда ферментов ( обеспечиваюших
образование
сульфатированных мукополисахаридов . Весьма важным доказательством
служит и то ( что меченые предшественники включаются в гепарин
гранул
тучных клеток ( сам же предварительно меченый гепарин в них не
обна-
руживается . Кроме гепарина в гранулах тучных клеток разных видов
мле-
копитающих содержатся нейтральные мукополисахариды ( гепарин - моно-
сульфат . Основу гранул представляет комплекс белок - гепарин .
Гепарин
существует преимущественно в жесткой валентной комбинации с белками
и практически не обнаруживается в заметных количества
| |  скачать работу |
Гепарин |
