Исследование клеточного цикла методом проточной цитометрии
енения в ДНК-гистограмме можно рассматривать как
проявление папилломо-вирусной инфекции в этиологии кондиломы шейки
матки (K.C.Tsou, D.H.Hong, M.Varello et al, 1984).
Кроветворная система
При цитометрическом анализе клеточных элементов крови используют
критерии, которые включают довольно широкий спектр параметров. Это
в первую очередь цитометрические маркеры с использованием
специфических красителей на РНК, ДНК, различных ферментативных
систем (эстеразу, фосфатазу). Используются также размерные
критерии, которые включают объем, площадь, периметр и диаметр ядра
и цитоплазмы клеток, а также ядерно-цитоплазматическое отношение.
При исследовании диагностического материала при острых и
хронических формах лейкозов методами цитометрии обнаружены
некоторые различия для клеточных элементов той или иной группы
гемобластозов. Используя морфометрические методы оценки размерных
признаков ядра и цитоплазмы бластных клеток, обнаружена строгая
корреляция величины клеток и FAB (франко-американо-британской)-
классификации лейкозов. При сопоставлении количественных данных,
полученных при исследовании клеточных элементов при острых
лимфобластном и миелобластном лейкозах, классифицируемых по
морфологическим признакам на подгруппы М1 – М6 согласно FAB-
классификации, определены различия между двумя вариантами лейкозов,
кроме подгруппы М2. Регистрируемые различия в размере бластных
клеток связаны с фазами клеточного цикла. Установлено, что клетки
при остром миелобластном лейкозе в S-фазе цикла характеризуются
большим размером ядра. Для этой же форме лейкоза, но подгруппы М1
характерна более малая доля клеток в S-фазе клеточного цикла
(M.Efrench, P.A.Bryon, D.Fiere et al, 1981).
Молочная железа
С целью повышения диагностических возможностей цитологического
метода при добро- и злокачественных опухолях молочной железы,
определения их гистологических вариантов, разработки
прогностических критериев заболевания – также используются данные
морфометрии и цитоспектрофотометрии. При объективизации
цитологических препаратов исходя из информативности следующих
признаков: диаметр, периметр и площадь ядра и цитоплазмы, ядерно-
цитоплазматическое отношение, текстура хроматина, содержание ДНК и
РНК. На основании цитометрических исследований установлены
некоторые закономерности, характерные для злокачественных форм
опухолей молочной железы. Это вариабельность ядерно-
цитоплазматического отношения, нарастание размера ядра и содержания
ДНК. Между двумя последними показателями обнаружена корреляционная
зависимость, характеризующаяся следующими особенностями. Показано,
что клетки с некоторой атипией, которая выражается в увеличении
площади ядра, распределяются различно по фазам клеточного цикла.
Около 21% клеток, находящихся в области 4с ДНК-гистограммы, имеют
площадь ядер свыше 125 мкм2. При площади ядер от 50 до 100 мкм2
основная масса клеток находится в G1-фазе цикла и только около 5%
клеток приходятся на гипердиплоидную область распределения ДНК
(C.J.Cornelisse, A.J.Van Driel-Kulker, F.Meyer, J.S.Ploem, 1985).
Показатель ДНК (количество ДНК в 1 клетке опухоли на количество ДНК
в нормальной клетке) в различных типах злокачественных опухолей
молочной железы значительно варьирует, однако чаще наблюдается
тетраплоидия (60 – 80%), доброкачественные опухоли, как правило,
диплоидные. Сравнительная оценка содержания ДНК в клетках молочной
железы при доброкачественных и раковых процессах показала
определенную зависимость между соотношением клеток по фазам цикла.
Установлено, что с прогрессированием процесса количество диплоидных
клеток в G1-фазе цикла убывает и при III – IV стадии ракового
процесса составляет 64%. Количество тетраплоидных клеток нарастает
в 2 раза и составляет около 17% общего количества клеток по
сравнению с пролиферативной формой мастопатии и в 3 раза по
отношению к непролиферативной форме мастопатии.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, как проточная, так и статическая цитометрия
позволяет исследовать многие важные параметры клеточного цикла.
Наиболее распространенной задачей, решаемой с помощью данного
класса приборов, является идентификация и подсчет клеток,
находящихся в различных периодах клеточного цикла. В последнее
время параллельно с этими параметрами с помощью цитометров
исследуют также динамику экспрессии многих важных клеточных
маркеров, что может иметь диагностическое и прогностическое
значение. Важно отметить, что принципиальных различий между двумя
типами цитометрии, по-видимому, не существует. Поэтому с помощью
достаточно простых и недорогих приборов можно воспроизводить весьма
эффективные методики исследования клеточного цикла, первоначально
разработанные для дорогостоящих проточных цитометров. Такие системы
статической цитометрии включают в себя люминесцентный микроскоп,
черно-белую или цветную телевизионную камеру высокой
чувствительности, устройство для оцифровки телесигнала и компьютер.
В последнее время в подобных системах все более широко применяются
цифровые телекамеры, которые подключаются к компьютеру через
высокопроизводительные порты нового поколения (универсальный
последовательный порт). Это позволяет создавать недорогие и
достаточно мощные системы для статической цитометрии, которые могут
успешно конкурировать как с проточными цитометрами, так с
конфокальными микроскопами. В целом можно сделать вывод о
перспективности данного направления в цитологии, дающего
возможность широкого применения методов количественной микроскопии
в научных исследованиях и клинической практике.
ЛИТЕРАТУРА
1. Брамберга Б.М., Зитаре И.Я., Плегере Д.П., Смилтниекс Э.Х.
Терминологический словарь морфологических признаков клетки для
автоматизации цитологической диагностики и оценки
эффективности лечения. – Рига, 1970. – 160 с.
2. Введение в количественную цитохимию. М., Мир, 1969, 439с.
3. Исаев В.Л., Пинчук В.Г., Исаева Л.М. Современные методы
автоматизированных цитологических исследований. – Киев: Наук.
думка, 1988. – 218 с.
4. Лимфоциты. Методы / под пед. Дж. Клауса-М., Мир, 393с.
5. Молекулярная клиническая диагностика. Методы / под ред.
С.Херрингтона, Дж.Макги. – М.: Мир, 1999. – 558с.
6. Полетаев А.И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии,
молекулярной биологии, биотехнологии и медицине. М., ВИНИТИ,
1989, 87с.
| | скачать работу |
Исследование клеточного цикла методом проточной цитометрии |