|
Mycobacterium tuberculosis ультрадыбысты дезинтеграты мен липополисахаридті антигенінің моноклоналды антиденелерді өндіретін гибридті жасушалар штамдарын алу
-
|
17
|
1B3
|
1:4
|
1:2
|
1:2
|
1:2
|
-
|
18
|
2Д3
|
1:4
|
1:4
|
1:4
|
1:2
|
-
|
19
|
2E10
|
1:4
|
1:2
|
1:2
|
1:2
|
-
|
20
|
3B8
|
1:4
|
1:4
|
1:4
|
1:4
|
-
|
21
|
2G7
|
1:8
|
1:4
|
1:4
|
1:2
|
-
|
22
|
3F5
|
1:16
|
1:16
|
1:8
|
1:2
|
-
|
23
|
1B9
|
1:4
|
1:4
|
1:2
|
1:2
|
-
|
24
|
1F7
|
1:4
|
1:2
|
1:2
|
1:2
|
-
|
25
|
2G9
|
1:8
|
1:8
|
1:4
|
1:2
|
-
|
4-ші кесте мәліметтері бойынша М tиbегсиlоsіs-тін УДД антигеніне телімді антиденелерді түзетін 15 гибридомалардың барлықтары бес рет тексеру барысында да өз белсенділіктерін сактағандығы айқындалды, 15 гибридома ішінен 1G3, 1Д7 және 2С10 деп аталатын гибридті клондардың синтездейтін антиденелерінің титрі 1:64 болса, қалғандарының түзетін антиденелер титрі 1:64 бен 1:32 шамаларында болды.
М. tuberculosis-тің ЛПС антигенге қарсы антиденелерді түзетін гибридомалардың барлығын төрт рет тестілеу нәтижесінде 1:2 мен 1:16 аралығындағы титрлерді көрсетсе, бесінші рет тексеру барысында өздерінің антиденелік белсенділіктерін тұтас жоғалтқандығы анықталып отыр.
Сонымен, әрі қарайғы жұмыстарымызда тұракты антиденелерді түзуші клондарды М. tuberculosis УДД-мен иммунделген тышкандар лимфоциттерінен пайда болған гибридомалар арасынан ғана тандай алдық.
1Д7, 2С10 және 103 жасушалар клондары анағұрлым белсенді және тұрақты гибридомалар лимитті сұйылту әдісімен клондаудан өткізілді (5-кесте).
Кесте 5 — Моноклоналды антиденелерді түзетін гибридома жасушаларын клондау нәтижелері
Клон атауы
|
Субклондар саны
|
МКА клон – өнімдерінің саны
|
Субклондар белсенділігі %
|
Дақылдық сұйықтық титрі
|
Субклондар атауы
|
1Д7
|
40
|
27
|
67,5
|
1:16-1:128
|
1Д7А2
|
2С10
|
25
|
20
|
80,0
|
1:8-1:32
|
2C10F3
|
1G3
|
38
|
30
|
78,9
|
1:32-1:256
|
1G3H2
|
Бұл ретте бастапқы ата-аналық жасушадан гибридомдардың позитивті субклондарының шығуы 67,5%-дан 80,0%-тты құрады. Гибридомалардың алынған субклондарының ішінде микобактериалды антигендер эпитопына туыстас МКА-дің жоғары пролиферативтік белсенділігімен және өнімділігімен сипатталатын әрбір гибридомадан бір клоннан тандалып алынды. Аталмыш гибридомдардың барлық субклондарының өсінді сұйыктығының кұрамындағы моноклоналды антиденелердің титрлері 1:32 — 1:256 шамасында болды.
Гибридома штамдарының өнімділігі 3-4 тәулік бойы өсірілген гибридомалардың өсінді сұйыктығындағы моноклоналды антиденелердің концентрациясы 125 мкг/мл-ге жетті. Гибридома штаммдарын ВАLВ/с тышқандарының кұрсақ қуысында in vivo жағдайында өсіргенде олардың өнімділігі айтарлыктай жоғары болды. Өйткені, асцитті сұйыктықтағы моноклоналды антиденелердің концентрациялары 4-6 мг/мл-ге дейін жиналды, яғни асцит сұйыктығындағы антиденелер мөлшері дақылдық ортанын супернатантымен салыстырғанда 400-1600 есеге жоғарылап отыр. Сәйкесінше асцит сұйыктығындағы антиденелер титрі де а
| | скачать работу |
Mycobacterium tuberculosis ультрадыбысты дезинтеграты мен липополисахаридті антигенінің моноклоналды антиденелерді өндіретін гибридті жасушалар штамдарын алу |