Mycobacterium tuberculosis ультрадыбысты дезинтеграты мен липополисахаридті антигенінің моноклоналды антиденелерді өндіретін гибридті жасушалар штамдарын алу

Келесі зерттеуде асцит сұйыктығының моноклоналды антиденелерінің белсенділігі мен телімділігі Mycobacterium туысына жататын әр түрлі бактерия ангигендерін колдану аркылы иммунды ферменттік талдаудың жанама әдісіне анықталды. (6-кесте).

Кесте 6 — Моноклоналды антиденелердің белсенділігі мен телімділігін иммунды ферменттік талдаудың жанама әдісіне тексеру натижесі

6-шы кесте мәліметтері бойынша 1Д7А2, 2С10FЗ және 1G3Н2 гибридом штаммдарының моноклоналды антиденелерінің Мусоbacterium tuberculosis жасушаларымен 1:102400-1:104800 титрде әрекеттесе, Мусоbacterium bovis жасушаларымен 1:400-1:800 титр аралығында ғана байланысқа түсіп отыр. Ал Мусоbacterium avium, іпtracellulare, scrofulaceum,, каnsassii, fortuitum және рhlеі түрлерімен әрекеттеспейтіндігі анықталды.

Басқа микобактериалды антигендерге қатысты МКА телімділігін талдауда 1Д7А2, 2С10F3 және 1G3Н2 гибридома штаммдары синтездейтін моноклоналды антиденелер Мусоbасterium bovis шт. 8. тұтас жасушасы компоненттерінің кұрамынан туыстас эпитоптар аныкталды. Мусоbacterium аvіит мен атипті микобактериялардың (М. рhіеі, М. scrofulaceum) тұтас жасушалары құрамында зерттелетін штаммдардың МКА танитын эпитоптары жоқ екендігін айта кеткен жөн. Бұл М. tuberculosis-тің тұтас жасушасына тән эпитоптарға моноклоналды антиденелердің барлықтарының да телімділігінің жоғары екендігін дәлелдейді.

Моноклоналды антиденелердің класын анықтау тышкандардың иммуноглобулиндеріне ІgМ, ІgА, IgG, ІgG2, ІgG2b (Sigma, США) қарсы монотелімді қан сарысуларын қолдану аркылы диффузиялык преципитация реакциясында (ДПР) жүзеге асырылды.

Аталмыш тәсілді жүргізу барысында монотелімді қан сарысуы мен МКА үлгілері бар шұңқыршыктарының араларында анык преципитация сызығы пайда болғанын көреміз. Қорыта келе моноклоналды антиденелердің барлық үш түрі де IgG1 класына жататындығын дәлелдеп берді.

Аффинділік байланыс константын анықтау көмегімен сандык түрде өлшенуі мүмкін. 1Д7А2 жэне 2С10FЗ штаммдарының моноклоналды антиденелерінің өз антигендерімен байланысу константасы сәйкесінше 1х10‾⁸М және 1х10^_9М болады. Ал 1G2Н2 штамының моноклоналды антиденелері жоғарыда көрсетілген антиденелермен салыстырғанда төмен аффинділікке ие болды. Алынған МКА түрлерінің иммундыхимиялык сипаттамасын зерттеу бойынша алынған мәліметтер 7-ші кестеде көрсетілген.

Кесте 7 — Гибридом штаммдары МКА иммундыхимиялык касиеттері

     Иммуноглобулинді препараттарының тазалығын зерттеу мақсатында аммоний сульфатымен тазартылған МКА 0,1% натрий додецилсульфаты бар 10% полиакриламидті гельдегі электрофорез әдісімен талданды.

Электрофорез нәтижесінде МКА барлык түрлері молекулалык салмақтары 60 кДа жэне 20 кДа болатын екі ақуызды фракцияға бөлінді, бұл иммуноглобулиндердің ауыр және жеңіл тізбектеріне сәйкес келеді. Электрофореграммада баска жолақтар байқалмады, бұл зерттелген моноклоналды антиденелердің тазалығын көрсетеді.

Сонымен, 1Д7А2, 2С10FЗ және 1G3H2 штамдарының түзегін МКА мен иммундыхимиялык қасиеттері жағынан антигендерге койылатын талаптарға сәйкес келеді және оларды жұкпалы ауруларды, соның ішінде туберкулез балауына арналған иммунды ферменттік тест-жүйесін әзірлеуге қажетті негізгі препарат ретінде пайдалануға болады [6].

1 2 3 4

скачать работу

Отправка СМС бесплатно