Главная    Почта    Новости    Каталог    Одноклассники    Погода    Работа    Игры     Рефераты     Карты
  
по Казнету new!
по каталогу
в рефератах

Методы разделения иммуноглобулинов

 Д  (7,5  -  12,0%).  В  молекулах  IgG
содержится около  2,9%  углеводов.  В  составе  иммуноглобулинов  обнаружены
манноза, галактоза, галактозамин, глюкозамин, фукоза и сиаловая кислота.
    Изучение углеводных групп представляет  большой  интерес,  обусловленный
их участием в самосборке  молекулы  иммуноглобулина  М  из  полимеризующихся
субъединиц ( Каверзнева и  др.,  1975;  Лапук и др.,  1975;  Хургин  и  др.,
1975;  Каверзнева , 1981; Каверзнева , Чухрова, 1984; Каверзнева, 1984).
    Предполагается,  что  включение глюкозомина и маннозы  на  раннем  этапе
сборки   в   тяжелую    цепь    молекул     иммуноглобулинов    способствует
конформационным изменениям, облегчающим замыкание S-S- связей. Эти  углеводы
играют определенную роль  при  секреции  иммуноглобулинов  из  продуцируемых
клеток (Сидорова, 1971).
    Электрофоретические свойства.   Иммуноглобулины  -  наименее  заряженные
белки сыворотки крови и обладают малой электрофоретической подвижностью.   В
электрическом поле при щелочных значениях среды  иммуноглобулины  G   и  его
подклассы занимают область (- гдобулинов, М и А зону ( - глобулинов.
    Антигенные  свойства.  1.  Молекулы   иммуноглобулинов  имеют  различные
антигенные  структуры.  Все  их  антигенные  детерминанты  кодируются  тремя
несцепленными группами аутосомных генов.  Одна группа кодирует тяжелую  цепь
того или  иного  класса,  другая - легкую k- типа, третья - легкую (-типа.
    2. Так как  полипептидные  цепи  состоят  из  двух  различных  участков-
вариабельного (V) и постоянного (С),  каждая из трех  групп  генов  включает
набор генов вариабельной - V и постоянной областей -С-гены.  Таким  образом,
синтез каждой полипептидной  цепи  молекулы  иммуноглобулина  контролируется
двумя структурными генами,  а не одним,  как при  синтезе   других   белков.
Один ген кодирует вариабельную область цепи,  другой- постоянную. Этот  факт
дополняет  существующее  правило  "один  ген  -  одна  полипептидная   цепь"
(Фуденберг и др., 1975). Причем  существуют  многие  гены  для  вариабельных
областей полипептидной цепи,   что  связано  с  многообразием  специфических
активных центров.
    3. Выяснилось,  что V-гены тесно сцеплены c  С-генами   и  располагаются
не только на одной хромосоме»,  но и  в  непосредственной  близости.  Сборка
целой молекулы иммуноглобулина происходит из  двух  тяжелых  и  двух  легких
цепей  (  2Н2Lк  или  2Н2L(),  синтезированных  по  генетическим   матрицам,
расположенным  в  двух  разных  хромосомах.  По   некоторым   представлениям
(Кульберг, 1985;  Петров,  1987),  вначале  соединяется  одна  из  легкой  и
тяжелой цепей, а затем обе части собираются в целую молекулу.
    4. Показано, что в одной  хромосоме  расположены  гены,  детерминирующие
синтез V- участка тяжелой цепи, а также гены С-участка  иммуноглобулинов  G,
М, А , т.е. в одной цепочке находятся  гены  V,  С(,  С(,  С(.  Установлено,
чтоVH участок цепи, кодируемый одним геном, может быть обнаружен  в  составе
IgМ, IgG и IgA, т.е. может быть соединен  с  постоянными  участками  тяжелых
цепей разных классов - С(, С(, С(. Вопрос о выборе клеткой V-  или  С-  гена
при синтезе иммуноглобулина изучался многими авторами.(Незлин, 1972,  Рохлин
, 1976, Петров, 1982, 1987).
    Каждая  индивидуальная  клетка  вырабатывает   антитела   только   одной
специфичности по правилу "одна клетка " одно антитело" (Петров , 1987).  Это
означает, что в клетке активно функционируют только один  вариант  гена  VH,
один - гена СH и по одному соответствующему гену одной из легких цепей.  Все
остальные структурные гены выключены. В  каждой  отдельно  взятой  антитело-
образующей клетке из  всего  множества  структурных  генов  иммуноглобулинов
функционирует их минимальное количество,  необходимое  для  синтеза  антител
одной специфичности и одного типа.  Таким  образом,  в  основе  многообразия
специфичности антител лежит функционирование в лимфоидной  системе  большого
количества клеток и их потомков  -клонов  клеток-  продуцентов  одного  вида
антител.  Следовательно,  количество  специфичностей  антител  соответствует
количеству  клонов  клеток-   антителопродуцентов,   различающихся   генами,
функционирующими в них.
    Установлено,  что  V-ген  данной  специфичности  способен  поо^  чередно
ассоциировать с  генами,  кодирующими  С(,  С(,  С(,  т.е.антителообразующие
клетки способны переключать синтез иммуноглобулина М на IgG  и  на  IgA,  не
изменяя антительной специфичности. Таким образом, антитела против  альбумина
быка  могут  находиться  как  во   фракции   IgG,   так   и   во   фракциях:
иммуноглобулинов М и А.

                     КЛАССЫ И ПОДКЛАССЫ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
    Как уже указывалось, иммуноглобулины имеют общие  характерные  свойства.
Однако их отдельные классы  и  подклассы  отличаются  первичной  структурой,
антигенными и физико-химическими свойствами и биологической активностью.
    а) Иммуноглобулины класса G. IgG представляет собой  наиболее  изученное
антитело, в  большом  количестве  присутствующее  в  сыворотках  крови  всех
млекопитающих и птиц. IgG  составляет  около  70-80%  от  общего  содержания
иммуноглобулинов. Молекулярная масса - 150 000 - 160 000 (Незлин, 1972).
    Молекула иммуноглобулина G- построена из  двух  тяжелых  и  двух  легких
полипептидных  цепей,  соединенных  дисульфидными      связями.   Характерны
тяжелые полипептидные цепи. IgG человека  существует  в  виде  4  подклассов
(G1, G2, G3, G4, отличающихся строением постоянных участков  тяжелых  цепей,
а следовательно, и антигенными и биологическими  свойствами  (Незлин,  1972,
Герман  и  др.,  1977,  Басова,  Стефани,  1977).  Подклассы  различаются  2
количеством дисульфидных связей, соединяющих тяжелые цепи: в молекулах G1  и
G4 их по 2, в G2, - 4, а в G3, -5. IgG1 составляет 70% от общего  содержания
IgG, а IgG2, IgG3, IgG1 18, 8 и 3%, соответственно.
    У всех изученных видов животных найдены два подкласса IgG:  относительно
медленно передвигающиеся в электрическом поле G2 и более  подвижные  G1.  Их
молекулы имеют  различные  антигенные  и  биологические  свойства,  а  также
способность к перевариванию протеолитическими ферментами (Незлин, 1972).
    Расшифрована  первичная  структура  обеих   цепей   иммуноглобулина   G1
(Edelman, 1973). Тяжелые цепи его состоят из одной  вариабельной  области  -
VH и 3 постоянных участков - Сн1, Сн2 и  Сн3.  Длину  вариабельных  областей
составляют 114, а  постоянных  -  330  аминокислотных  остатков,  легкие  из
областей V1, СL.
    С помощью электронной микроскопии (Valentine,  Jreen,  1967),  выяснено,
что  молекула  иммуноглобулина  G  имеет  V-образную  форму,  при  этом  Fab
фрагменты образуют "лапки" молекулы , а  Fc-  фрагмент  -  ее  "хвост".  Она
имеет два активных центра, находящихся  в  вариабельной  части  молекулы,  а
именно на кончиках Fab фрагментов.
    При электрофорезе в щелочных значениях рН  IgG  передвигается  медленнее
всех сывороточных белков. При иммуноэлектрофорезе он  образует  вытянутую  в
дугу  линию  преципитации,  прокрывающую  зону  расположения  (-  глобулинов
(Незлин,  1972).  Нативная  молекула  IgG1  обычно  не  содержит   свободных
сульфгидрильных групп (Троицкий и др., 1965, Cristian, 1965).  IgG  содержит
около 2,9% углеводов, которые находятся в тяжелых цепях (Незлин , 1968).
    У человека только IgG способен проникать через  плаценту  и  попадать  в
кровеносную  систему  плода,  обеспечивая  тем  самым  пассивный   иммунитет
новорожденных в ранний постнатальный период (Брондэ, Рохлин, 1978).
    б) Иммуноглобулины класса М.  IgМ - один  из  высокомолекулярных  белков
сыворотки  крови  и  имеет  молекулярную  массу  около  1   млн,   константу
седиментации 19 Se. Молекула IgМ состоит из 5 субъединиц, каждая из  которых
напоминает молекулу IgG (рис. 2). Субъединица  состоит  из  двух  тяжелых  и
двух легких цепей с молекулярными массами 23 000 и 60 000 соответственно, (-
 цепь состоит из 5 доменов VH, С1(- С4(, легкая - изVL, и СL. Молекула  1IgM
имеет 10 активных центров, расположенных в Fab областях ( Прокопенко, Равич-
Щербо, 1974, Литмен , Гуд, 1981).
    IgМ  содержит  около  10%  углеводов.,  функция  которых  обусловлена  с
образованием  макромолекулы  IgM  из  7   S   субъединиц   к   формированием
пространственной структуры  молекулы  (Каверзнева,  1984).  IgМ  по  рваному
реагирует на восстановление 2- меркаптоэтанолом: при мягком  он  распадается
на 5-7 S субъединиц, а при более глубоком на тяжелые и легкие  полипептидные
цепи.


                     Рис. 2. Схема строения молекулы IgМ
               ( из книги "Иммуноглобулины". -М.: Мир, 1981).
    Радиальная упаковка субъедикиц IgМ, на  одной  из  которых  расположение
гомологичных областей (доменов) L- (VL .и СL) и  H--цепей  (VH,  С1(,  С4().
Показаны наиболее важные продукты ферментативной    фрагментации    IgМ    и
предполагаемое положение J- цепи.

    Важнейшее свойство молекулы IgМ, необходимое для ее  функционирования  -
конформационная  подвижность при изменении условий внешней среды (Каюшина  и
др.,  1985, Свергун и др.,  1585).  При  электрофорезе   IgМ   передвигается
быстрее иммуноглобулинов класса G  во  фракции  (2-  глобулинов.  Найдено  2
подкласса IgМ,  с  различными  антигенными   свойствами   (Гауровец,   1969,
Бернет, 1971, Незлин , 1972, Кульберг , 1975).
    Не менее   значительно  нахождение  его  на поверхности  (-лимфоцитов  в
качестве их основных рецепторов  (Петров,  1987).  IgM  обнаружен   у   всех
исследованных  позвоночных   (Koshland,  1975).  У  человека  после  45  лет
содержится  1,71  мг/мл   IgМ   или  около  10%   от    общего    количества
иммуноглобулинов  (Стефани,  Вальтищев,  1977).   IgM-  антитело  первичного
иммунного ответа, так как синтезируется первым после антигенной  стимуляции.
 Через несколько дней синтез IgМ переключается на  I
1234
скачать работу

Методы разделения иммуноглобулинов

 

Отправка СМС бесплатно

На правах рекламы


ZERO.kz
 
Модератор сайта RESURS.KZ